高效液相色譜法在食品**檢測中的應(yīng)用!

食品貿(mào)易的全球化使廣大消費(fèi)者受益，大量高品質(zhì)、價格合理、**的食品應(yīng)運(yùn)而生，滿足著廣大消費(fèi)者的需要。日趨加速的城市化狀況導(dǎo)致食品的制作、運(yùn)輸、貯存、銷售需求不斷增加。同時還會有一些不法制假商販制造或販賣偽劣食品，甚至在食品中摻入有毒化學(xué)品，給消費(fèi)者造成極大傷害，這就需要有一套完整的監(jiān)測監(jiān)督機(jī)制。作為降低食源性危害的有效手段，許多食品**項目正越來越側(cè)重于從農(nóng)田到餐桌的整個過程，雖然國家在保證食品**方面作大量的工作，每年仍有相當(dāng)數(shù)量的消費(fèi)者因進(jìn)食受污染的食品而中毒、發(fā)病、乃至死亡。當(dāng)今農(nóng)產(chǎn)品、食品**已成為世人十分關(guān)注的熱門話題，食品**監(jiān)測面臨著嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，因此，急需建立快速調(diào)查食源性**和監(jiān)測食品污染的措施和方法。本文就高效液相色譜(HPLC)技術(shù)在食品**檢測方法中的應(yīng)用概況作一綜述。

    食品不**因素及HPLC應(yīng)用范圍

    據(jù)報道，每年世界上發(fā)生的食品污染病例在7000萬例以上。食源性**的爆發(fā)已引起媒體的廣泛關(guān)注和消費(fèi)者的關(guān)心。當(dāng)前食品中的不**因素主要表現(xiàn)在以下幾個方面[2]：微生物、寄生蟲等生物污染；環(huán)境污染；農(nóng)用、獸用化學(xué)物質(zhì)的殘留；自然界存在的天然**；營養(yǎng)素不平衡；食品加工和貯藏過程中產(chǎn)生的**；食品添加劑的使用；食品摻偽；新開發(fā)的食品資源及新工藝產(chǎn)品；包裝材料。食品中*常見的有毒有害物質(zhì)是有機(jī)合成農(nóng)藥、獸藥殘留物及污染物和致病菌。

    高效液相色譜法(HPLC)是上世紀(jì)60年代末70年代初發(fā)展起來的一種新型分析分離技術(shù)。它是由現(xiàn)代高壓技術(shù)與傳統(tǒng)的液相色譜方法相結(jié)合，加上高效柱填充物和高靈敏檢測器所發(fā)展起來的新型分離分析技術(shù)，是以經(jīng)典液相色譜法為基礎(chǔ)，引入了氣相色譜的理論與實踐方法，流動相改為高壓輸送，采用高效固定相在線檢測手段發(fā)展而成的分離分析方法，分離機(jī)制是靠被分離組分的分子與流動相分子爭奪吸附表面活性中心的吸附能力差別而分離(可用吸附系數(shù)Ka衡量吸附能力的差異)，是現(xiàn)代分離分析的重要手段，隨其分離檢測技術(shù)的日益完善，已被廣泛應(yīng)用于各個學(xué)科中。由于它只要求樣品能制成溶液，而不需要?dú)饣?，因此不受樣品揮發(fā)性的約束。對于揮發(fā)性低，熱穩(wěn)定性差，分子量大的高分子化合物以及離子型化合物尤為有利，如氨基酸、蛋白質(zhì)、生物堿、核酸、甾體、脂類、維生素、***等分子量較大，沸點(diǎn)較高的合成**以及無機(jī)鹽類。所以說HPLC具有適用范圍廣、分離效率高、速度快、流動相可選擇范圍寬、靈敏度高、色譜柱可反復(fù)使用、流出組分容易收集、**等優(yōu)點(diǎn)。世界上約有80%的有機(jī)化合物可以用HPLC來分析測定[1]。

    HPLC對食品添加劑及農(nóng)藥的測定

    蘇丹(Sudan)色素是一種人工合成染料，在化工生產(chǎn)中主要用于對油類、蠟和肥皂的染色。有關(guān)研究表明，蘇丹Ⅰ號(Sudan Ⅰ)會導(dǎo)致鼠類患癌，它對人類肝細(xì)胞也顯現(xiàn)出可能致癌的特性。李軍[3]等建立了食品中4種蘇丹色素的高效液相色譜同時測定方法。采用乙腈提取后經(jīng)凝膠滲透色譜法對樣品進(jìn)行凈化，利用反相高效液相色譜法，以乙腈-酸性水溶液為流動相，采用梯度洗脫，以二極管陣列檢測器定性定量測定食品中的4種蘇丹色素，結(jié)果*低檢出限分別為0.102、0.097、0.074、0.099 mg/kg。阿斯巴甜、糖精鈉、乙酰磺胺酸鉀等添加劑對人體有一定的毒害作用。特別是阿斯巴甜，它在體內(nèi)代謝過程中的主要降解物為苯丙氨酸和天門冬氨酸，對于苯丙酮尿病(PKU)患者，因其代謝缺陷，體內(nèi)過多的苯丙氨酸可影響患者的發(fā)育，所以有該病的患者要禁用添加阿斯巴甜的食品。劉思潔[4]等建立了一種可以同時測定飲料中糖精鈉、乙?；前匪徕洝⑺拱吞鸬姆椒?，采用C18反向柱，以乙腈-0.02 mol/L硫酸銨溶液(5∶95)為流動相，在214 nm波長處檢測。結(jié)果以上三種甜味添加劑在飲料中*低檢出限為 4 μg/ml。目前蔬菜水果中不同種類農(nóng)藥的殘留測定方法主要是氣相色譜法(GC)或氣相色譜 -質(zhì)譜法 (GC-MS )，但GC對沸點(diǎn)高或熱穩(wěn)定性差的農(nóng)藥需進(jìn)行衍生化處理，這樣就不可避免地增加了樣品前處理的難度，也使它的應(yīng)用受到一定程度的限制。李永新[5]等建立了同時測定蔬菜水果12種農(nóng)藥殘留的反相高效液相色譜分析方法。將樣品搗碎，用乙酸乙酯超聲提取，經(jīng)Florisil固相萃取柱凈化、正己烷-二氯甲烷( 1∶1)洗脫、氮?dú)獯蹈?、甲醇溶解并定容后，采用高效液相色譜柱分離、紫外檢測，以外標(biāo)法定量。結(jié)果表明：5種有機(jī)磷農(nóng)藥、6種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥和除草劑二甲戊樂靈的檢測限為0.114-2.65 ng。應(yīng)用該法對從市場上隨機(jī)購買的蓮白、小白菜、黃瓜等20個蔬菜樣品和

    作者簡介：陸興毅(1975-)，男，廣西田陽縣人，主管藥師，理學(xué)士。蘋果、梨等20個水果樣品進(jìn)行檢測，其中氧化樂果的檢出率分別為55%和45%，辛硫磷的檢出率分別為50%和30%，由此可見，國家明文規(guī)定的不得用于蔬菜、瓜果的劇毒、高毒農(nóng)藥仍有檢出。

    HPLC對食品中獸藥殘留物的測定

    1.鹽酸克侖特羅(俗稱瘦肉精)系β2受體興奮劑，禁止作為畜禽類生長促進(jìn)劑使用。近年來，我國曾多次報道了因食用含有鹽酸克侖特羅殘留的豬肉及內(nèi)臟等造成的中毒事件。陳金枝[6]等建立HPLC法測定豬眼 、豬肝 、豬肺中微量鹽酸克侖特羅，樣品經(jīng)乙醚-丁醇提取，用Hypersil C18色譜柱，甲醇-0.01 moL/L磷酸二氫鉀溶液為流動相。結(jié)果樣品中鹽酸克侖特羅*小檢測量為0.20 ng。用該法對市場上豬眼、豬肝、豬肺等30份樣品進(jìn)行測定，結(jié)果在豬肺中的殘留在檢出限以下，豬眼、豬肝中*大殘留分別為0.96、0.22 mg/kg。

    2.磺胺類**是抗感染藥劑，具有**作用，因此在飼料中常常被添加。但是，過量的**殘留會損害人體健康。郭根和[7]等采用反相高效液相色譜法，用C18色譜柱、紫外檢測器，以5 mmol/L NaH2PO4溶液-乙腈溶液為流動相，測定蝦中磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺二甲氧基嘧啶、磺胺喹惡啉等5種磺胺類**殘留，結(jié)果*低檢測限為2 μg/kg，符合痕量測定的要求。

    3.薄海波[8]等采用柱切換直接進(jìn)樣高效液相色譜法測定蜂蜜中3種四環(huán)素類***(土霉素OTC、四環(huán)素TC、金霉素CTC)的殘留量，先用緩沖溶液溶解樣品后，直接進(jìn)樣，以二次蒸餾水作流動相在C18預(yù)柱上在線富集和凈化，然后用柱切換閥將預(yù)柱與一個C18分析柱接通，以草酸溶液-乙腈-甲醇作流動相，紫外檢測器在350 nm處檢測。結(jié)果各組分回收率大于86%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于8.0%，*低檢出濃度為0.005 mg/kg，滿足了日本等國對進(jìn)口蜂王漿中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留量(0.05 mg/kg)要求。

    4.孔雀石綠、結(jié)晶紫屬三芳基甲烷化學(xué)物質(zhì)，長期以來許多國家曾將其作為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的**劑，可用于魚類高發(fā)的水霉病、原蟲病的控制，但是進(jìn)一步研究證實，孔雀石綠等進(jìn)入人類或動物機(jī)體后，通過生物轉(zhuǎn)化可產(chǎn)生致癌、致畸、致突變等副作用 ......